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樣本、文庫、重複、lane、run - 二代測序原理及名詞解釋

參考:

獨占鳌頭的Illumina儀器(二代測序篇)

HiSeq2000測序原理、流程與儀器

NGS文庫制備的方法比較[心得點評]

各種測序文庫建構方式

樣本:就是待測的DNA、RNA或蛋白序列,樣本來源單一的就是單樣本,樣本來源于多處就是多樣本,一般我們測序用的樣本都是單樣本,但有時候有特殊需求,我們會把一些樣本混合在一起測序,也就是多樣本測序。

文庫:二代三代讀長都是有限的,為此我們必須将全長的序列打斷成小片段的文庫才能進行測序。總的來說,在NGS分析之前,制備RNA或DNA的主要步驟包括:片段化和/或篩分指定長度的目标序列;将目标片段轉化成雙鍊DNA;在片段末端連上寡核苷酸接頭;以及定量最終的文庫。

單端測序和雙端測序:單端測序(Single-read)首先将DNA樣本進行片段化處理形成200-500bp的片段,引物序列連接配接到DNA片段的一端,然後末端加上接頭,将片段固定在flow cell上生成DNA簇,上機測序單端讀取序列(圖1)。 Paired-end方法是指在建構待測DNA文庫時在兩端的接頭上都加上測序引物結合位點,在第一輪測序完成後,去除第一輪測序的模闆鍊,用對讀測序子產品(Paired-End Module)引導互補鍊在原位置再生和擴增,以達到第二輪測序所用的模闆量,進行第二輪互補鍊的合成測序(圖2)。

flowcell:FC,一個FC就是一個載玻片狀的載體,它是測序的場所。

lane:表示測序晶片上的一條流通槽,測序文庫與試劑均在裡面,測序信号的掃描也是按照一條lane上的一個tile進行。一個FC有多條lane,一般是8條

run:測序儀運作一次

把上面4篇文章看完基本就能了解二代測序的原理了~

樣本、文庫、重複、lane、run - 二代測序原理及名詞解釋