动物源性食品中寄生虫的检测——华支睾吸虫

Clonorchis sinensis是一种重要的人畜共患寄生虫，可导致人类，狗，猫，猪和其他野生动物的肝胆管和胆囊的肝脏肿大，引起其他病变。它可以引起毛发病，一种动物，人类经常通过食用含有中国睾丸的未煮熟的淡水鱼或虾而感染。华致睾丸抑制病是我国最严重的食源性寄生虫病之一。

1 病原体特征

花石睾丸激素是女性和男性的致敬吸盘。其生活史复杂，按发育顺序可分为成虫、卵、毛毛虫、细胞糖、浣熊、尾巴、囊虫和幼虫八个阶段。成虫寄生虫存在于肝胆管系统中，特别是在胆管分支中，偶尔在胰管中。成虫体窄、扁平、前端薄，后端呈钝圆，形状如葵花籽粒，体台无棘轮，褐色半透明。成虫大小（10~25）毫米×（3~5）毫米，有口、腹两吸盘，消化器官有口、咽、食道和肠管分支。生殖器官是雌性和雄性，两个睾丸都是分支的，在蠕虫的后端来回排列。成虫缓慢蠕变，大部分吸附在胆管的粘膜上。

它的卵是人类寄生虫中最小的卵，约（27~35）米×（12~20）米，椭圆形，肩峰，像灯泡，壳厚，有成熟的丁香。它是黄褐色的，顶部有一个蛋盖，下端有一个小的突出部分。

成虫是发现在猫、狗和人的肝胆管中，用胆汁产生的卵到肠道，用粪便从体内排出，虫卵等落入池塘和沟渠中，由第一中间宿主淡水螺钉（匐匐螺杆、红豆螺丝、长角螺母等）吞下，蛋毛在肠中孵化， 鼻涕虫的淋巴系统和肝脏进入蜗牛，发育成细胞，树莓和尾巴。尾矿离开蜗牛并逃逸到水中，钻入第二中间宿主淡水鱼和淡水虾体，形成囊性囊性囊肿。人、猫、狗等通过吞咽含有囊性囊性的生鱼或半活鱼虾而感染。囊壳可以被胃酸和胰蛋白酶消化，幼虫从十二指肠中的幼虫中逸出。幼虫沿着胆管逆行到胆管中的肝脏，在那里它们最终发育成成虫。从感染囊肿到成年昆虫的成熟排卵大约需要1个月，在合适的条件下，从卵到成虫的整个生命史约3个月，成虫在狗体内可以存活3年零6个月或更长时间，在人体寿命超过20年。

2 流行病学特征

该病主要见于东亚国家，如日本、朝鲜和中国。在中国，除青海、西藏、甘肃、内蒙古、新疆和宁夏外，所有省份均受疫情影响并流行。广东是中国发病率最高的省份，东北三江平原也是中国睾丸病高发地区，每年4-5月睾丸感染率高。

该病的流行与感染源的数量、河流和池塘的分布、粪便对水源的污染、第一和第二中间宿主的分布和繁殖、当地居民的饮食习惯以及猫、狗和猪的管理密切相关。

猫和狗大多通过吃生鱼感染，猪通过松散繁殖和食用生鱼和内脏等饲料感染。人们大多通过食用生的或未煮熟的鱼和虾而感染，例如生的或未煮熟的鱼片和醉虾，未煮熟的火锅或烧烤食品。彻底煮熟的食物是预防人类感染寄生虫病的最有效方法。

除了寄生虫的饮食传播外，口腔粪便是另一个重要的传播途径。在流行地区，水源的粪便污染是导致淡水螺丝虫感染率高的重要因素。在南方，厕所建在鱼塘上，猪舍建在池塘上，疾病的卵与人类和动物粪便一起进入池塘，感染螺丝钉和鱼，助长了流行病。厕所建设远离池塘、人畜排泄物后处理和排出，严格遵守良好的个人卫生习惯和改善不良生活习惯，有助于防止中国睾丸蠕虫的感染和传播。

3 危害

人们吃鱼虾后感染华芝睾酮，华芝睾酮不致病，当人体内寄生虫体较小时，轻度感染不出现症状，或只有胃肠道不适症状。严重感染只出现明显的症状，可出现消化不良、腹痛、腹泻、精神低下，主要危害是患者的肝损伤，肝大，肝痛，由于患者长期带虫，蠕虫的代谢分泌和蠕虫本身的机械刺激，对肝脏和胆汁系统造成慢性损伤，引起胆汁性胆管炎， 胆结石、梗阻性黄疸、胰腺炎，甚至肝胆管肿瘤，晚期严重感染可引起肝硬化、腹水等临床表现，甚至死亡。

儿童和青少年感染华氏睾酮后，临床表现往往较严重，致死率较高。除消化道症状外，还常有营养不良、生长发育障碍、贫血、低蛋白血症、浮肿、肝肿大，甚至肝硬化等，极少数患者可患上侏儒症。

卫生部从2001年6月到2004年底进行的蠕虫调查结果表明，中国睾丸的感染率为2.4%，感染人数超过1200万。近年来，我国睾丸蠕虫病的发病率明显呈下降趋势。

4 国内外卫生要求

卫生要求和处理：如果损坏轻微，则部分清除损坏，其余部分不受工厂（现场）的限制;

5 检测方法

可根据流行病学、临床表现、实验室检查等进行确认。华氏睾酮病的临床表现有时不够典型，应注意识别肝炎、急慢性胆囊炎、胃、十二指肠溃疡病等。注意询问病史，了解患者是否曾居住在流行地区，是否有食用未煮熟的鱼或生淡水鱼虾的病史。华氏睾酮病的早期症状不明显，通常主要是消化系统的症状，有植物性神经系统症状。体格检查发现肝脏大小有不同程度，往往伴有左叶肿胀较为明显，血液常规检测中嗜酸性粒细胞的比例增大，应进一步进行病原体检查和特异性免疫诊断。

5.1 病原体检查

通过病原体检查发现粪便或十二指肠液中的中国睾丸卵是诊断该疾病的基础。从粪便中发现华子睾丸卵是最重要的诊断证据，有很多检查方法，主要是涂片和卵子采集两类。

5.1.1 直接涂片法

虽然直接涂片方法的操作简单，但由于使用少量粪便，检出率不高，容易漏诊。直接涂抹粪便：卵是人类寄生虫卵中最小的，约30米×14米，略带灯泡形，壳厚，棕黄色，顶部有小覆盖物，下端有小结节，卵中有成熟的钼。

改进的Kato-Katz厚膜涂片法（Kato-Katz甘油纸厚涂片透明法）被认为是大规模肠道寄生虫调查中粪便检查的有效方法。可用于虫卵的定性和定量检查。对于中国睾丸的检查，检出率可以达到95%以上。

5.1.2 套蛋方法

卵子收集法的检测率高于直接涂片法，卵子收集法包括浮蛋收集法和沉淀收集法。沉淀收集蛋常用于水洗离心沉淀法和乙醚沉淀法，沉淀后再进行涂抹观察。浮蛋收集法常用的盐水浮选法和相对密度为1.23的硫酸锌溶液浮选收集法，然后进行涂片观察。一般的漂浮法不如沉淀法有效。

5.1.3 十二指肠引流胆汁检查

离心沉淀检查也将通过从十二指肠中提取的胆汁进行，卵子也可以检测用于诊断。

5.2 免疫学方法

常用方法包括皮内检查、间接红细胞凝血试验（IHAT）、间接荧光抗体试验（IFAT）和ELISA。ELISA检测患者血清中的特异性抗体，该方法检测中华睾丸酸中毒患者并用于流行病学调查，具有简单、快速、灵敏度高、特异性强等优点，阳性率超过88.8%，是一种理想的免疫学方法。

5.2.1 内皮试验

对于成虫抗原进行皮内试验，建议选择高稀释度抗原进行皮肤试验。通常用成人盐水冷浸作为抗原（稀释1：（15000~30000）进行皮内试验，阳性率可高达97.9%，粪阳性顺从率高达99.5%。该试验操作简单易行，特异性高，几乎不与其他吸虫性疾病发生交叉反应，具有辅助诊断和筛查价值。

间接红细胞凝血试验（IHAT）

它具有操作简单，判断结果快的优点，但其稳定性并不理想。抗原制备方法基本相同，但抗原的提取、抗原浓度对于过敏性红细胞、红细胞的治疗等步骤和条件都不同，检测阳性率为68.4%~98.7%，差异较大。

5.2.3 酶联免疫吸收试验

该方法检测中华睾丸患者血清中的特异性抗体，用于流行病学调查，具有简单、快捷、灵敏度高、特异性强等优点，阳性率超过88.8%，是免疫测定的理想方法。

Biant Sandwich ELISA患者血清中特异性循环抗原的检测明显优于检测抗体的方法。

5.3 分子生物学方法

首先，PCR及其衍生技术的建立，基于基因序列的分子生物学检测方法得到了迅速发展，该技术主要用于人体睾丸的诊断，该方法的特异性和灵敏度均在70%以上。

此外，基于LAMP检测技术设计合成了中国睾酮18S rRNA基因的特定引物和探针，建立了RT-PCR检测系统。上游引物： 5' -GCATTTGTAGGGTGTGTA-3'， 下游引物： 5'-AACCTCTCTCTCTCTCCA-3'， 放大器约111bp;在对中式睾丸进行实时荧光定量PCR检测的同时，用华氏睾酮的特异性引物，在相同的反应条件下，用华子睾酮的特异性引物对弓形虫病、日本血吸虫病、广州圆线虫等的DNA进行PCR扩增，以确定是否存在交叉反应。RT-PCR检测方法特异性好，灵敏度好，适用于华池睾酮领域的快速检测和定量分析。它是核酸分子生物学检测病原体的新方法，具有快速、灵敏、方便的特点，灵敏度为PCR的10~100倍。